1.引物、探针设计与合成:根据基因序列设计并合成特异性real-time PCR引物和探针。
2. RNA抽提:
(1)组织样品:取100mg组织样品加1ml Trizol,匀浆后抽提RNA。
(2)细胞样品:取1×107个细胞,PBS洗涤三次,去PBS后加1ml Trizol,裂解后抽提RNA。
3. RNA质量检测:
(1)测定RNA在260nm和280nm波长处的吸收值,以计算其浓度并评估纯度。
(2)变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。
4. 逆转录:使用逆转录酶(RNase H-)将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 标准曲线制备:将标准品质粒做梯度稀释后,进行real-time PCR扩增和检测,以Ct值对拷贝数绘制标准曲线。
7. 定量PCR反应:将待测样品加入优化过的real-time PCR反应液中,进行real-time PCR扩增,检测目的基因和内参基因的Ct值。每反应均做3个平行复孔。
8. 数据分析:
(1)相对定量:使用△△Ct法计算目的基因在不同组间的表达差异。
(2)绝对定量:将样品的Ct值代入标准曲线,以对目的基因进行定量。
(3)熔解曲线分析:确定产物特异性。
9. 实验报告:
(1)详细实验步骤。
(2)数据结果和相关图表
服务特色
1. 从样品RNA提取到获取反应结果,瑞晶全程提供服务。
2. 提供详细实验报告、数据结果和相关图表。
3. 样品可以是细胞、动物组织、植物组织、血液、昆虫组织、寄生虫类等等。
服务报价
客户提供
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交付标准
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实验周期
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服务价格
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1. 新鲜的组织样品或细胞样品,干冰保存。
2. 背景资料:目的基因的Gene ID、样品来源和mRNA丰度等。
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1. 详细实验步骤
2. 数据结果和相关图表
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2-3周
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1. RNA提取:
少于20样品:¥50/样品
多于20样品:¥20/样品
2. 定量PCR反应:
1个基因:¥50/反应
2个基因:¥20/反应
3个基因以上:¥100/反应
3. 引物和探针合成:
引物:¥0.5/bp
探针:¥800/条
4. 内参引物探针:免费
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